在Western Blot（WB）实验中，归一化是实验数据处理的关键步骤。WB实验常设计不同的内部对照或检查点，对样本或者实验中的偏差进行监控、修正。在WB中的偏差通常来自蛋白样本浓度不均、凝胶上样不一致或转膜不完全。这些不一致性能够最终靠凝胶和膜的可见光或荧光标记法监控，用

  （比如GAPDH、β-tubulin、β-actin或cyclophilin B）进行归一化校正, 来保证实验结果的可靠性。

  当前有三份蛋白样品S1、S2、S3，选择的内参基因为Control，需要检测目的蛋白Test在这三份样品中的相对表达量。

  经过电泳、转膜、封闭、孵育、清洗等一系列实验操作后，获得一张蛋白印迹膜。用GelView 6000 Pro全自动化学发光成像系统或GelView 6000Plus智能图像工作站进行显影成像，获得的发光图。如图1所示：

  具有蛋白归一化分析功能，可以直接输出蛋白归一化结果，不有必要进行额外的操作，方便快捷，

  如图3中橙色数据条所示），因此还一定要通过内参蛋白进行校正，将内参蛋白的灰度值归一化，可得到三个样品中目的蛋白的真实灰度值，该结果才能比较准确地反映目的蛋白的含量。计算结果如图4所示：

  当前有四份蛋白样品S1、S2、S3、S4，需要检测目的蛋白Test在这四份样品中的相对表达量（本次实验中使用的非特异性荧光染料，可以对所有蛋白进行染色；二抗为FITC荧光标记）。

  经过电泳、转膜、封闭、孵育、清洗等一系列实验操作后，获得一张蛋白印迹膜。

  用GelView 6000Plus智能图像工作站的荧光模块进行荧光成像，结果

  如图5所示，泳道内所有蛋白均产生荧光，荧光强度能代表样品总蛋白的含量：

  使用475nm的蓝光（不同荧光染料所需波长参照试剂的使用说明）激发目的蛋白Test，结果如图7所示：

  从上图能够准确的看出，目的蛋白在S3中的发光强度最大，接近S2的2.5倍。然而经过蛋白归一化后，结果，如图9所示：

  我们显而易见目的蛋白在四份样品中表达量基本一致，所以我们说蛋白归一化是必须的。

  在Western Blot实验中，归一化处理是关键步骤，归一化以后才能进行蛋白浓度的对比。其中，内参蛋白校正由于其发展时间久、成本低等优点，受众多，积累了大量的使用经验，同时有丰富的试剂种类可供选择，对于常规实验对象的研究是很好的方法；总蛋白校正则是直接测得整个泳道（样本）内所有蛋白的含量，不需要过多的担心内参蛋白本身带来的误差，对于没有参考资料的新样本来说十分适合。所以，两者是相辅相成的，你们可以根据自己的实际情况进行选择。

  除了选择正真适合的归一化方法以外，一台高灵敏度的光信号捕捉设备也是获得理想实验数据所必需的。博鹭腾公司在光子信号的高效率识别接收领域有着多年的研发经验，旗下的GelView6000系列新产品配备了科研级冷CCD相机、多色荧光光源以及功能强大的BioAnaly分析软件，能对泳道内的蛋白做准确的定量和定性分析，完全兼容这两种归一化方法的需求，并且设备操作简单便捷，5分钟即可上手，欢迎各位老师咨询试用。

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